Hotstart Taq DNA Polymerase
Ang Hot Start Taq DNA Polymerase (Antibody modification) ay isang hot-start thermostable DNA polymerase mula sa Thermus aquaticus YT-1，na nagtataglay ng 5′→3′ polymerase activity at 5′ flap endonuclease activity.Ang hot-start na Taq DNA polymerase ay isang Taq DNA polymerase na binago ng mga thermolabile na Taq antibodies.Ang pagbabago ng antibody ay tumaas ang pagtitiyak, pagiging sensitibo, at ani ng PCR.
Mga bahagi
| Component | HC1012A-01 | HC1012A-02 | HC1012A-03 | HC1012A-04 |
| 5×HC Taq Buffer | 4×1 mL | 4×10 ML | 4×50 ML | 5×400 ML |
| Hot Start Taq DNA Polymerase (Binago ang Antibody) (5 U/μL) | 0.1 mL | 1 mL | 5 mL | 10×5 mL |
Mga aplikasyon
10 mM Tris-HCl (pH 7.4 sa 25 ℃), 100 mM KCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM dithiothreitol, 0.5% Tween20, 0.5% IGEPALCA-630 at 50% Glycerol.
Kondisyon ng Imbakan
Transportasyon sa ilalim ng 0°C at maiimbak sa -25°C~-15°C.
Kahulugan ng Yunit
Ang isang yunit ay tinukoy bilang ang dami ng enzyme na nagsasama ng 15 nmol ng dNTP sa acid insoluble na materyal sa loob ng 30 minuto sa 75°C.
Kontrol sa Kalidad
1.EndAktibidad ng onuclease:Ang incubation ng 20 U ng enzyme na may 4 μg pUC19 DNA sa loob ng 4 na oras sa 37 ℃ ay nagresulta sa walang nakikitang pagkasira ng DNA gaya ng tinutukoy ng gel electrophoresis.
2.5 kb Lambda PCR:25 cycle ng PCR amplification ng 5 ng Lambda DNA na may 1.25 unit ng Taq DNA Polymerase sa pagkakaroon ng 200 µM dNTP at 0.2 µM primer na nagreresulta sa inaasahang 5 kb na produkto.
3.Aktibidad ng Exonuclease:Ang incubation ng 50 µl reaction na naglalaman ng minimum na 12.5 U ng Taq DNA Polymerase na may 10 nmol 5´-FAM oligonucleotide sa loob ng 30 minuto sa 37 ℃ ay hindi nagbubunga ng degradation.
4.Aktibidad ng RNase:Ang incubation ng 10 µL reaction na naglalaman ng 20 U ng enzyme na may 1μg ng RNA transcripts sa loob ng 2 oras sa 37°C ay nagresulta sa walang detectable degradation ng RNA gaya ng tinutukoy ng gel electrophoresis.
5.Hindi Aktibidad ng init:Hindi.
Sistema ng Reaksyon
| Mga bahagi | Dami |
| Template ng DNAa | opsyonal |
| 10 μM Forward Primer | 0.5 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 0.5 μL |
| dNTP Mix (10mM bawat isa) | 0.5 μL |
| 5×HC Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseb(5U/μL) | 0.125 μL |
| Tubig na walang nuclease | Hanggang sa 25 μL |
Mga Tala:
1) a.
| DNA | Halaga |
| Genomic | 1 ng-1 μg |
| Plasmid o Viral | 1 pg-1 ng |
2) b.Ang pinakamainam na konsentrasyon ng Taq DNA Polymerase ay maaaring mula sa 5-50 units/mL (0.1-0.5 units/25 µL reaction) sa mga espesyal na aplikasyon.
Thermal cycling protocol
PCR
| Hakbang | Temperatura(°C) | Oras | Mga cycle |
| Paunang denaturationa | 95 ℃ | 1-3mins | - |
| Denaturasyon | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 cycle |
| Pagsusupilb | 45-68 ℃ | 15-60 s | |
| Extension | 68 ℃ | 1kb/min | |
| Pangwakas na Extension | 68 ℃ | 5mins | - |
Mga Tala:
1) Ang paunang denaturation ng 1 min sa 95°C ay sapat na para sa karamihan ng mga amplification.Para sa mahirap na mga template, inirerekomenda ang mas mahabang denaturation na 2-3mins sa 95°C.Sa colony PCR, inirerekomenda ang paunang 5mins denaturation sa 95°C.
2) Ang hakbang ng pagsusubo ay karaniwang 15-60 s.Ang temperatura ng pagsusubo ay batay sa Tm ng pares ng primer at karaniwang 45-68 ℃.
