Mouse Genotyping Kit

Cat No: HCR2021A

Ang produktong ito ay isang kit na idinisenyo para sa mabilis na pagkilala sa mga genotype ng mouse, kabilang ang DNA crude extraction at PCR amplification system.Maaaring gamitin ang produkto para sa PCR amplification nang direkta mula sa buntot ng mouse, tainga, daliri ng paa at iba pang mga tisyu pagkatapos ng simpleng cleavage ng Lysis Buffer at Proteinase k.Walang overnight digestion, phenol-chloroform extraction o column purification, na simple at nagpapaikli sa pag-ubos ng oras ng mga eksperimento.Ang produkto ay angkop para sa amplification ng mga target na fragment hanggang sa 2kb at multiplex na mga reaksyon ng PCR na may hanggang 3 pares ng mga primer.Ang 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix ay naglalaman ng genetically engineered DNA polymerase, Mg²⁺, mga dNTP at isang naka-optimize na buffer system upang magbigay ng mataas na kahusayan sa amplification at tolerance sa inhibitor, upang ang mga reaksyon ng PCR ay maisagawa sa pamamagitan ng pagdaragdag ng template at mga primer at pag-rehydrate ng produkto sa 1×.Ang produktong PCR na pinalaki gamit ang produktong ito ay may kitang-kitang "A" na base sa dulong 3′ at maaaring direktang gamitin para sa pag-clone ng TA pagkatapos ng purification.

Mga bahagi

Mga Kondisyon sa Imbakan

Ang mga produkto ay dapat na nakaimbak sa -25~-15 ℃ sa loob ng 2 taon.Pagkatapos ng lasaw, ang Lysis Buffer ay maaaring itago sa 2~8 ℃ para sa panandaliang maramihang paggamit, at ihalo nang mabuti kapag ginagamit.

Aplikasyon

Ang produktong ito ay angkop para sa mouse knockout analysis, transgenic detection, genotyping at iba pa.

Mga tampok

1.Simpleng operasyon: hindi na kailangang kunin ang genomic DNA;

2.Malawak na aplikasyon: angkop para sa direktang pagpapalakas ng iba't ibang mga tisyu ng mouse.

Mga tagubilin

1.Paglabas ng genomic DNA

1) Paghahanda ng lysate

Ang tissue lysate ay inihanda ayon sa bilang ng mga sample ng mouse na i-lysed (tissue lysate ay dapat ihanda on-site ayon sa dosis at halo-halong mabuti para sa paggamit), at ang proporsyon ng mga reagents na kinakailangan para sa isang sample ay ang mga sumusunod:

2) Sample na Paghahanda at Lysis

Inirerekomendang Paggamit ng Tissue

Kumuha ng naaangkop na dami ng mga sample ng tissue ng mouse sa malinis na centrifuge tubes, magdagdag ng 200μL ng sariwang tissue lysate sa bawat centrifuge tube, vortex at shake, pagkatapos ay i-incubate sa 55℃ sa loob ng 30mins, at pagkatapos ay painitin sa 98℃ sa loob ng 3mins.

3) Centrifugation

Iling mabuti ang lysate at centrifuge sa 12,000 rpm sa loob ng 5mins.Ang supernatant ay maaaring gamitin bilang template para sa PCR amplification.Kung kailangan ang template para sa pag-iimbak, ilipat ang supernatant sa isa pang sterile centrifuge tube at iimbak sa -20 ℃ sa loob ng 2 linggo.

2.Pagpapalakas ng PCR

Alisin ang 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix mula sa -20℃ at lasaw sa yelo, paghaluin nang baligtad at ihanda ang PCR reaction system ayon sa sumusunod na talahanayan (operate on ice):

Tandaan:

a) Ang halagang idinagdag ay hindi dapat lumampas sa 1/10 ng system, at kung labis ang idinagdag, ang PCR amplification ay maaaring ma-inhibit.

Mga Inirerekomendang Kundisyon ng PCR

Tandaan:

a) Temperatura ng pagsusubo: Sa pagtukoy sa halaga ng Tm ng panimulang aklat, inirerekomendang itakda ang temperatura ng pagsusubo sa mas maliit na halaga ng Tm ng panimulang aklat na +3~5 ℃.

Mga Karaniwang Problema at Solusyon

1.Walang naka-target na strip

1) Labis na produkto ng lysis.Piliin ang pinakaangkop na dami ng template, karaniwang hindi hihigit sa 1/10 ng system;

2) Masyadong malaki ang sample size.Dilute ang lysate ng 10 beses at pagkatapos ay palakihin, o bawasan ang laki ng sample at muling lysis;

3) Hindi sariwa ang mga sample ng tissue.Inirerekomenda na gumamit ng mga sariwang sample ng tissue;

4) Hindi magandang kalidad ng primer.Gumamit ng genomic DNA para sa amplification upang i-verify ang kalidad ng primer at i-optimize ang disenyo ng primer.

2.Non-specific na amplification

1) Ang temperatura ng pagsusubo ay masyadong mababa at ang cycle number ay masyadong mataas.Taasan ang temperatura ng pagsusubo at bawasan ang bilang ng mga cycle;

2) Masyadong mataas ang konsentrasyon ng template.Bawasan ang dami ng template o palabnawin ang template ng 10 beses pagkatapos ng amplification;

3) Mahina ang pagtitiyak ng panimulang aklat.I-optimize ang disenyo ng panimulang aklat.

Mga Tala

1.Upang maiwasan ang cross contamination sa pagitan ng mga sample, dapat maghanda ng maraming sampling tool, at ang ibabaw ng mga tool ay maaaring linisin ng 2% sodium hypochlorite solution o nucleic acid cleaner pagkatapos ng bawat sampling kung kinakailangan ang paulit-ulit na paggamit.

2.Inirerekomenda na gumamit ng mga sariwang tissue ng mouse, at hindi dapat masyadong malaki ang sampling volume upang maiwasang maapektuhan ang mga resulta ng amplification.

3.Dapat iwasan ng Lysis Buffer ang madalas na pag-freeze-thaw, at maaaring iimbak sa 2~8 ℃ para sa panandaliang maramihang paggamit.Kung nakaimbak sa mababang temperatura, maaaring mangyari ang pag-ulan, at dapat na ganap na matunaw bago gamitin.

4.Dapat iwasan ng PCR Mix ang madalas na freeze-thaw, at maaaring itago sa 4 ℃ para sa panandaliang paulit-ulit na paggamit.

5.Ang produktong ito ay para lamang sa siyentipikong eksperimentong pananaliksik at hindi dapat gamitin sa klinikal na diagnosis o paggamot.