Bst 2.0 DNA Polymerase(Glycerol free)
Ang Bst DNA polymerase V2 ay nagmula sa Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I, na mayroong 5′→3′ DNA polymerase na aktibidad at malakas na aktibidad sa pagpapalit ng chain, ngunit walang 5′→3′ exonuclease na aktibidad.Ang Bst DNA Polymerase V2 ay perpektong angkop para sa strand-displacement, isothermal amplification LAMP (Loop mediated isothermal amplification) at mabilis na sequencing.
Mga bahagi
| Component | HC5005A-01 | HC5005A-02 | HC5005A-03 |
| BstDNApolymerase V2(Glycerol-free)(8U/μL) | 0.2 mL | 1 mL | 10 ML |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 1.5 ML | 2×1.5 mL | 3×10 ML |
| MgSO4(100mM) | 1.5 ML | 2×1.5 mL | 2×10 ML |
Mga aplikasyon
1.LAMP isothermal amplification
2.DNA strand single displacement reaction
3. Mataas na GC gene sequencing
4.DNA sequencing ng nanogram level.
Kondisyon ng Imbakan
Transportasyon sa ilalim ng 0°C at maiimbak sa -25°C~-15°C.
Kahulugan ng Yunit
Ang isang yunit ay tinukoy bilang ang dami ng enzyme na nagsasama ng 25 nmol ng dNTP sa acid insoluble na materyal sa loob ng 30 minuto sa 65°C.
Kontrol sa Kalidad
1.Protein Purity Assay (SDS-PAGE):Ang kadalisayan ng Bst DNA polymerase V2 ay ≥99% na tinutukoy ng pagsusuri ng SDS-PAGE gamit ang Coomassie Blue detection.
2.Aktibidad ng Exonuclease:Ang incubation ng 50 μL na reaksyon na naglalaman ng minimum na 8 U ng Bst DNA polymerase V2 na may 1 μg λ -Hind Ⅲ digest DNA sa loob ng 16 na oras sa 37 ℃ ay nagreresulta sa walang detectable degradation gaya ng natukoy.
3.Aktibidad ng Nickase:Ang incubation ng 50 μL na reaksyon na naglalaman ng minimum na 8 U ng Bst DNA polymerase V2 na may 1 μg pBR322 DNA sa loob ng 16 na oras sa 37°C ay nagreresulta sa walang nakikitang pagkasira gaya ng tinutukoy.
4.Aktibidad ng RNase:Ang incubation ng isang 50 μL na reaksyon na naglalaman ng minimum na 8 U ng Bst DNA polymerase V2 na may 1.6 μg MS2 RNA sa loob ng 16 na oras sa 37°C ay nagreresulta sa walang nakikitang pagkasira gaya ng tinutukoy.
5.E. coli DNA:Ang 120 U ng Bst DNA polymerase V2 ay na-screen para sa pagkakaroon ng E. coli genomic DNA gamit ang TaqMan qPCR na may mga panimulang aklat na tukoy para sa E. coli 16S rRNA locus.Ang E. coli genomic DNA contamination ay ≤1 Copy.
LAMP Reaksyon
| Mga bahagi | 25μL |
| 10×HC Bst V2 Buffer | 2.5 μL |
| MgSO4 (100mM) | 1.5 μL |
| dNTP (10mM bawat isa) | 3.5 μL |
| SYTO™ 16 Berde (25×)a | 1.0 μL |
| Pinaghalong panimulang aklatb | 6 μL |
| Bst DNA Polymerase V2 (Glycerol-free) (8 U/uL) | 1 μL |
| Template | × μL |
| ddH₂O | Hanggang sa 25 μL |
Mga Tala:
1) a.SYTOTM 16 Berde (25×): Ayon sa mga pang-eksperimentong pangangailangan, maaaring gamitin ang ibang mga tina bilang kapalit;
2) b.Primer mix: nakuha sa pamamagitan ng paghahalo ng 20 µ M FIP, 20 µ M BIP, 2.5 µ M F3, 2.5 µ M B3, 5 µ M LF, 5 µ M LB at iba pang volume.
Reaksyon at Kondisyon
1 × HC Bst V2 Buffer, ang temperatura ng incubation ay nasa pagitan ng 60°C at 65°C.
Hindi Aktibidad ng init
80 °C, 20 min
