DNase I (Rnase Free)(5u/ul)
Cat No: HC4007A
Ang DNase I (Deoxyribonuclease I) ay isang endodeoxyribonuclease na maaaring tumunaw ng single- o double-stranded DNA.Kinikilala at pinuputol nito ang mga phosphodiester bond upang makabuo ng monodeoxynucleotides o single- o double-stranded oligodeoxynucleotides na may mga phosphate group sa 5'-terminal at hydroxyl sa 3'-terminal.Ang aktibidad ng DNase I ay nakasalalay sa Ca2+at maaaring i-activate ng divalent metal ions tulad ng Mn2+at Zn2+.5 mM Ca2+pinoprotektahan ang enzyme mula sa hydrolysis.Sa presensya ni Mg2+, ang enzyme ay maaaring random na makilala at maputol ang anumang site sa anumang strand ng DNA.Sa presensya ni Mn2+, ang mga dobleng hibla ng DNA ay maaaring sabay na makilala at mahati sa halos parehong site upang bumuo ng flat end na mga fragment ng DNA o malagkit na dulo ng mga fragment ng DNA na may 1-2 nucleotide na nakausli.
Mga bahagi
| Pangalan | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNase I, RNase-free | 20μL | 200μL | 1mL | 10 ML |
| 10×DNase I Buffer | 1mL | 1mL | 5 × 1mL | 5 × 10 mL |
Mga kondisyon ng imbakan
-25℃~-15℃ para sa imbakan;Transport sa ilalim ng mga ice pack.
Mga tagubilin
1. Ihanda ang reaction solution sa RNase-free tube ayon sa mga proporsyon na nakalista sa ibaba:
| Component | Dami |
| RNA | X µg |
| 10 × DNase I Buffer | 1μL |
| DNase I, RNase-free(5U/μL) | 1 U bawat µg RNA① |
| ddH2O | Hanggang 10μL |
Tandaan: ①Kalkulahin ang dami ng DNase I na kailangang idagdag batay sa dami ng RNA.
2. 37 ℃ sa loob ng 15 minuto;
3. Magdagdag ng 0.5M EDTA sa panghuling konsentrasyon na 2.5mM~5mM, at init sa 65℃ sa loob ng 10 minuto upang ihinto ang reaksyon.Maaaring direktang gamitin ang sample para sa susunod na reaksyon tulad ng reverse transcriptioneksperimento.
Kahulugan ng Yunit
Ang isang yunit ay tinukoy bilang ang dami ng enzyme na ganap na magpapababa ng 1µg ng pBR322DNA sa loob ng 10 minuto sa 37 ℃.
Kontrol sa Kalidad
RNase:Ang 5U ng DNase I na may 1.6µg MS2 RNA sa loob ng 4 na oras sa 37 ℃ ay hindi nagbubunga ng pagkasira bilangtinutukoy ng agarose gel electrophoresis.
Mga Tala
1. Mangyaring maghanda ng 0.5MEDTA nang mag-isa.
2. Gumamit ng 1U DNase I bawat µg ng RNA.Gayunpaman, kung ang RNA ay mas mababa sa 1µg, mangyaring gamitin ang 1U DNase I.
3. Mangyaring ilagay ang enzyme sa yelo sa panahon ng operasyon.
