Superstart qPCR Premix plus-UNG
Cat No: HCB5071E
Ang Superstart qPCR Premix plus-UNG ay isang espesyal na reagent na idinisenyo para sa Real Time PCR qualitative at quantitative reactions gamit ang probe-based detection, na partikular na binuo para sa mga proseso ng lyophilization.Naglalaman ito ng isang nobelang hot-start na enzyme na Hotstart Taq plus (DG), na mayroong aktibidad ng Taq enzyme nito na selyadong sa temperatura ng silid, na epektibong humahadlang sa hindi partikular na amplification na dulot ng primer na non-specific na annealing o primer na dimer formation sa ilalim ng mababang kondisyon ng temperatura, kaya nagpapabuti ang pagtitiyak ng reaksyon ng amplification.Gumagamit ang reagent na ito ng na-optimize na qPCR specific buffer at UNG/dUTP na anti-contamination system upang makamit ang mabilis na hot-starting, na lubos na nagpapahusay sa kahusayan at sensitivity ng mga reaksyon ng qPCR.Makakakuha ito ng magandang standard curves sa malawak na hanay ng mga quantitation area at tumpak na magsagawa ng quantitation, na epektibong maiwasan ang maling positibong amplification na dulot ng natitirang mga produkto ng PCR o aerosol contamination.Ang reagent na ito ay katugma sa karamihan ng fluorescent quantitative PCR instruments mula sa mga manufacturer gaya ng Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad at Roche atbp., at nagpapakita ng magandang katatagan sa lyophilized na anyo.
Komposisyon ng reagent
1. 5×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+libre) (DG)
2. 250 mM MgCl2
3. 4×lyoprotectant (opsyonal)
Mga Kondisyon sa Imbakan
Pangmatagalang imbakan sa -20 ℃;maaaring maimbak sa 4 ℃ hanggang 3 buwan.Haluing mabuti bago gamitin atiwasan ang paulit-ulit na pagyeyelo at lasaw.
Protocol ng Pagbibisikleta
| Pamamaraan | Temp. | Oras | Ikot |
| pantunaw | 50 ℃ | 2 min | 1 |
| Pag-activate ng polymerase | 95 ℃ | 1~5 min | 1 |
| Denature | 95 ℃ | 10~20 s | 40-50 |
| Pagsusuri at Pagpapalawig | 56~64℃ | 20~60 s | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction SyPaghahanda ng tangkay
|
Komposisyon |
25µL Dami |
50µL Dami |
Pangwakas na Konsentrasyon |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+libre) (DG) | 5µL | 10µL | 1× |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL | 0.9µL | 4.5 mM |
| 4×lyoprotectant1 | 6.25µL | 12.5µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Template ng DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | Hanggang 25µL | Hanggang 50µL | —— |
1. Ang panghuling konsentrasyon na 0.2μM para sa mga panimulang aklat ay karaniwang nagbubunga ng magagandang resulta;kapag mahina ang pagganap ng reaksyon, ayusin ang konsentrasyon ng primer sa loob ng hanay na 0.2-1μM kung kinakailangan.Ang konsentrasyon ng probe ay karaniwang na-optimize sa loob ng hanay na 0.1-0.3μM sa pamamagitan ng mga gradient na eksperimento upang makahanap ng mga pinakamainam na kumbinasyon.
2. Ang bilang ng kopya ng mga target na gene na nasa iba't ibang uri ng mga template ay nag-iiba;kung kinakailangan, maaaring isagawa ang gradient dilution upang matukoy ang pinakamainam na halaga ng karagdagan ng template.
3. Ang sistemang ito ay maaaring lyophilized;kapag ginagamit ng mga customer ang system na ito nang walang mga kinakailangan sa pagyeyelo-pagpatuyo, ang 4×lyoprotectant ay maaaring piliing idagdag; kung may mga produktong pinatuyong-freeze na kailangan, sa panahon ng pagpapatunay ng pagganap ng produkto ng mga likidong reagents, dapat itong magdagdag ng 4×lyoprotectant upang matiyak ang pagkakapare-pareho sa mga bahagi ng lyophilized system at mga epekto.
Kapag ang sistema ay ginagamitd para sa freeze-drying, ihanda ang sistema as sumusunod:
| Komposisyon | 25µL Sistema ng Reaksyon |
| 5 ×HotstartPremix plus-UNG (Mg2+libre) (DG) | 5µL |
| 250mM MgCl2 | 0.45µL |
| 4×lyoprotectant | 6.25µL |
| 25×Primer-Probe Mix | 1µL |
| ddH2O | Hanggang 18~20µL |
* Kung kailangan ng ibang sistema para sa freeze-drying, mangyaring kumonsulta nang hiwalay.
Proseso ng Lyophilizationss
| Pamamaraan | Temp. | Oras | Kundisyon | Presyon |
| Pre-freezing | 4 ℃ | 30 minuto | Hawakan |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 min | Paglamig | ||
| -50 ℃ | 180 min | Hawakan | ||
| Pangunahing Pagpapatuyo | -30 ℃ | 60 min | Pagpainit |
Ultimate Vacuum |
| -30 ℃ | 70 min | Hawakan | ||
| Pangalawang Pagpapatuyo | 25 ℃ | 60 min | Pagpainit |
Ultimate Vacuum |
| 25 ℃ | 300 min | Hawakan |
2. Ang proseso ng lyophilization sa itaas ay para sa sanggunian lamang.Ang iba't ibang uri ng produkto at iba't ibang freeze-dryer ay may iba't ibang mga parameter, kaya ang mga pagsasaayos ay maaaring gawin ayon sa aktwal namga kondisyon sa panahon ng paggamit.
3. Maaaring angkop ang iba't ibang proseso ng lyophilization para sa iba't ibang laki ng batch ng lyophilizedmga produkto, kaya ang sapat na pagpapatunay ng pagsubok ay dapat na maisagawa kapag ginamit para sa malakihang produksyon.
Mga tagubilin para sa paggamit ng lyophilized pulbos
1. Saglit na centrifuge ang lyophilized powder;
2. Magdagdag ng nucleic acid template sa lyophilized powder at magdagdag ng tubig hanggang 25µL;
3. Haluing mabuti sa pamamagitan ng centrifugation at patakbuhin sa makina.
Kontrol sa Kalidad:
1. Functional testing: sensitivity, specificity, reproducibility ng qPCR.
2. Walang exogenous nuclease activity, walang exogenous endo/exonuclease contamination.
Impormasyong teknikal:
1. Gumagamit ang Superstart qPCR Premix plus-UNG ng nobelang hot-start enzyme na nagbibigay-daan sa mabilis na pagsisimula ng mainit sa loob ng 1~5 minuto;sa pamamagitan ng espesyal na buffer formulation ito ay angkop para sa multiplex fluorescent quantitative PCR reactions.
2. Ito ay may mas mataas na pagtitiyak na makabuluhang nagpapabuti sa sensitivity ng fluorescence quantitative PCR limit detection, paggawa ng amplification curves normalization, fluorescence value ay nakakakuha ng malinaw na pagpapabuti sa mababang konsentrasyon ng mga template, na angkop bilang high sensitivity fluorescence quantitative PCR detection reagents.
3. Para sa mga primer na may mas mababang temperatura ng pagsusubo o mas mahaba sa 200bp na mga fragment, inirerekomenda ang 3-step na paraan.
4. Ang kahusayan sa paggamit ng dUTP at sensitivity sa UNG enzyme ay naiiba para sa iba't ibang mga target na gene, kaya kung ang paggamit ng UNG system ay humahantong sa pagbaba sa sensitivity ng pagtuklas, ang sistema ng reaksyon ay dapat ayusin at i-optimize.Kung kinakailangan ang teknikal na suporta mangyaring makipag-ugnayan sa aming kumpanya.
5. Gumamit ng mga nakalaang lugar at mga pipette bago at pagkatapos ng amplification, magsuot ng guwantes sa panahon ng operasyon at palitan ang mga ito nang madalas;huwag buksan ang reaction tube pagkatapos makumpleto ang PCR upang mabawasan ang kontaminasyon ng mga sample ng mga produkto ng PCR.
