Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Cat No: HCB5145A
Ang Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) ay isang multiplex quantitative PCR kit batay sa RNA bilang template.Sa proseso ng eksperimento, ang reverse transcription at quantitative PCR ay isinagawa sa parehong tubo, na pinasimple ang eksperimentong operasyon at binabawasan ang panganib ng kontaminasyon.Sa kit na ito, ang unang strand na cDNA ay mahusay na na-synthesize ng heat-resistant Reverse Transcriptase at quantitatively amplified ng HotStart Tag DNA Polymerase.Ang kit ay pangunahing naglalaman ng na-optimize na MP buffer, enzymes mix, atbp. Ang buffer solution ay naglalaman na ng Mg2+at dNTP.Bilang karagdagan, ang mga salik na maaaring epektibong humadlang sa hindi tiyak na PCR amplification at mapabuti ang kahusayan ng amplification ng maramihang mga reaksyon ng qPCR, na maaaring matiyak ang kahusayan ng amplification at magsagawa ng hanggang sa maramihang reaksyon ng amplification.Ang sistema ng dUTP/UDG ay idinagdag upang epektibong maiwasan ang panganib ng kontaminasyon ng aerosol.
Mga bahagi
1. Buffer
2. Paghalo ng Enzyme
Pagtutukoy
| Mainit na Simula | Built-in na mainit na simula |
| Paraan ng pagtuklas | Pagtuklas ng primer-probe |
| Paraan ng PCR | Isang hakbang RT-qPCR |
| Polymerase | Taq DNA polymerase |
| Uri ng sample | DNA |
Mga Kondisyon sa Imbakan
Ang produkto ay ipinadala na may tuyong yelo at maaaring itago sa -25~-15 ℃ sa loob ng 1 taon.Dapat itong iwasan ang madalasfreeze-thaw.Inirerekomenda na i-save nang hiwalay.
Mga tagubilin
1.Reaksyon Sistema
| Mga bahagi | Dami (μL) | Pangwakas na Konsentrasyon |
| 2 × MP Buffer | 12.5 | 1× |
| Paghalo ng Enzyme | 1 | - |
| Primer/Probe mix (2.5 μM) | 3 | 0.3μM |
| Template RNA | 1-10 | - |
| RNase Libreng H2O | hanggang 25 | - |
Mga Tala:
Siguraduhing ihalo nang mabuti bago gamitin, iwasan ang labis na mga bula na dulot ng marahas na panginginig ng boses.
a.Primer concentration: Primer mix kasama ang multiplex primer, depende sa sitwasyon, ang pinakamainam na konsentrasyon ng primer ay maaaring nasa pagitan ng 0.l at 1.0μM.
b.Probe concentration: Probe mix kabilang ang multiplex probe labeling difference fluorescent group, depende sa sitwasyon ang pinakamainam na probe concentration ay maaaring nasa pagitan ng 0.05 at 0.5μM.
c.Pagbabawas ng template: Ang qPCR ay lubos na sensitibo at inirerekumenda na palabnawin ang template.Ang halaga ng control Ct ay angkop sa pagitan ng 20 at 35.
d.Paghahanda ng system: Mangyaring maghanda sa ultra clean working table, at pipettor at reaction tube na walang nuclease residue;inirerekumenda na gamitin ang ulo ng baril na may elemento ng filter.Iwasan ang cross contamination at aerosol contamination.
2. Na-optimize na PagbibisikletaProtocol
| Ikot hakbang | Temp. | Oras | Mga cycle |
| Baliktad na transkripsyon | 50 ℃a | 20mins | 1 |
| Inisyal-denaturasyon | 95 ℃ | 5mins | 1 |
| Reaksyon ng amplification | 95 ℃ | 15seg |
40-45 |
| 60 ℃ b | 30seg c |
Mga Tala:
a.Baliktad na transkripsyon: Ang temperatura ay maaaring pumili ng 42°C o 50°C.
b.Reaksyon ng amplification: Ang temperatura ay inaayos ayon sa halaga ng Tm ng mga dinisenyong primer.
c.Fluorescence signal acquisition: Pakitakda ang eksperimental na pamamaraan ayon sa mga kinakailangan ng manwal ng instrumento.
Mga Tala
Mangyaring magsuot ng kinakailangang PPE, tulad ng lab coat at guwantes, upang matiyak ang iyong kalusugan at kaligtasan.
