2×Sensi Direct Premix-UNG (Probe qPCR)
Cat No: HCB5151A
Ang SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) ay idinisenyo upang direktang magsagawa ng PCR mula sa mga sample nang walang pagkuha ng DNA o paghahanda ng sample.Ang reagent na ito ay binubuo ng hot-start DNA polymerase, uracil DNA glycosylase (UNG), RNase Inhibitor, MgCl2, mga dNTP (na may dUTP sa halip na dTTP), at mga stabilizer, para sa quantitative PCR (qPCR).Ang reagent na ito ay preform ng mataas na inhibitor-tolerance, at sa gayon ay maaari itong direktang ilapat sa pagtuklas ng mga sample tulad ng throat swab, laway, anti-coagulated whole blood, plasma, at serum nang walang pagkuha ng DNA.Gumagamit ang reagent ng proprietary buffer para sa qPCR na may halo-halong enzyme ng anti-inhibitory DNA polymerase at UNG enzyme.Samakatuwid, maaari itong makakuha ng isang mahusay na amplification ng mga target na gene sa mga sample na naglalaman ng mga inhibitor at pagbawalan ang maling positibong amplification na dulot ng PCR residual at aerosol pollution.Ang reagent na ito ay katugma sa karamihan ng fluorescent quantitative PCR instruments, tulad ng Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad, Roche at iba pa.
Mga bahagi
1. 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix
2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
Mga kondisyon ng imbakan
Ang lahat ng mga bahagi ay dapat panatilihin sa -20 ℃ para sa pangmatagalang imbakan at 4 ℃ para sa hanggang 3 buwan.Mangyaring paghaluin nang maigi pagkatapos ng lasaw at centrifuge bago gamitin.Iwasan ang madalas na freeze-thaw.
Protocol ng Pagbibisikleta
| Hakbang | Temperatura | Oras | Ikot |
| pantunaw | 50 ℃ | 2min | 1 |
| Pag-activate ng polymerase | 95 ℃ | 1-5min | 1 |
| Denature | 95 ℃ | 10-20s | 40-50 |
| Pagsusuri/Pagpapalawig | 56-64 ℃ | 20-60s |
Mga Tagubilin sa Pipetting
| Reagent | Dami bawat reaksyon | Dami bawat reaksyon | Pangwakas na Konsentrasyon |
| 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1× |
| 50×SensiDirect Enzyme/UNG Mix | 0.5µL | 1µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Sample3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Kabuuang volume | 25 μL | 50 μL | - |
1. Ang panghuling konsentrasyon ng panimulang aklat ay karaniwang 0.2μM.Para sa mas mahusay na mga resulta, ang konsentrasyon ng panimulang aklat ay maaaring i-optimize sa loob ng hanay na 0.2-1μM.
2. Sa pangkalahatan, ang konsentrasyon ng probe ay maaaring i-optimize sa loob ng hanay na 0.1-0.3μM.Ang pinakamainam na konsentrasyon ng probe ay nauugnay sa real time na PCR amplification instrument, ang uri ng probe, at ang uri ng fluorescent labeling substance.Mangyaring sumangguni sa manu-manong instrumento o sa mga partikular na kinakailangan ng bawat fluorescent probe.
3. Ang iba't ibang uri ng sample ay naglalaman ng iba't ibang uri at nilalaman ng inhibitor at numero ng kopya ng target na gene.Ang dami ng sample ay dapat isaalang-alang ayon sa aktwal na kondisyon.Gumawa ng dilution ng sample sa pamamagitan ng pagdaragdag ng nuclease-free na tubig o TE Buffer, kung kinakailangan.
4. Inirerekomendang dami ng iba't ibang sample:
| Sample | Dami para sa isa 50 μL reaksyon | Pinakamataas ratio |
| Anticoagulated buong dugo | 2.5 μL | 5% |
| Plasma | 15 μL | 30% |
| Serum | 10 μL | 20% |
| Pamahid sa lalamunan | 10 μL | 20% |
| laway | 10 μL | 20% |
Kontrol sa Kalidad
1. Function detection: sensitivity, specificity at repeatability ng qPCR.
2. Walang exogenous nuclease activity: walang exogenous endonuclease at exonuclease pollution.
Mga Tala ng Produkto
1. Gumagamit ang produktong ito ng bagong uri ng hot-start DNA polymerase, na maaaring i-activate sa loob ng 1-5 minuto. Dahil ang reaksyon buffer nito ay na-optimize, ito ay mas angkop para sa double o multiple fluorescence quantitative PCR gamit ang probe method.
2. Kung ang halaga ng Rn ng PCR amplification ay masyadong mababa o ang amplification ay halatang inhibited, ang pagpapababa sa dami ng sample, ang pagtaas ng dami ng reaksyon o ang nakaraang pagbabanto ng sample ay maaaring mapabuti ang mga resulta.
3. Ang koleksyon ng dugo, laway, ihi, pamunas sa lalamunan, atbp. ay dapat sumunod sa mga kinakailangan sa klinikal na pamantayan, at maaaring gamitin ang sariwang sample upang maiwasan ang pagkasira ng nucleic acid.
4. Dahil ang iba't ibang amplicon ay may iba't ibang kahusayan sa paggamit sa dUTP at sensitivity sa UNG, ang mga reagents ay dapat na i-optimize kung ang detection sensitivity ay bumababa kapag gumagamit ng UNG system.Mangyaring makipag-ugnayan sa amin para sa teknikal na suporta kung kinakailangan.
5. Upang maiwasan ang paglaki ng mga carryover na produkto ng PCR sa pagitan ng mga one-step na reaksyon, ang nakalaang experimental area at pipette ay kinakailangan para sa amplification.Magpatakbo gamit ang mga guwantes at magpalit ng madalas at huwag buksan ang reaction tube pagkatapos ng PCR amplification.
