Pangkalahatang SYBR GREEN qPCR Premix (Asul)

Cat No: HCB5041B

Ang Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) ay isang paunang solusyon para sa 2×real-time na quantitative PCR amplification na nailalarawan sa mataas na sensitivity at specificity, kulay asul, at may epekto ng sample na pagsubaybay sa karagdagan.Ang pangunahing bahagi ng Taq DNA polymerase ay gumagamit ng antibody hot start upang epektibong pigilan ang hindi partikular na amplification dahil sa panimulang pagsusubo sa panahon ng paghahanda ng sample.Kasabay nito, idinaragdag ng formula ang mga salik na nagsusulong upang mapabuti ang kahusayan ng amplification ng reaksyon ng PCR at ipantay ang pagpapalakas ng mga gene na may iba't ibang nilalaman ng GC (30 ~ 70%), upang ang quantitative PCR ay makakuha ng magandang linear na relasyon sa isang malawak na dami. rehiyon.Ang produktong ito ay naglalaman ng espesyal na ROX Passive Reference Dye, na naaangkop sa karamihan ng mga instrumento ng qPCR.Hindi kinakailangang ayusin ang konsentrasyon ng ROX sa iba't ibang instrumento.Kinakailangan lamang na magdagdag ng mga panimulang aklat at mga template upang ihanda ang sistema ng reaksyon para sa pagpapalakas.

Mga bahagi

Universal Blue qPCR Master Mix

Mga kondisyon ng imbakan

Ang produkto ay ipinadala kasama ng mga ice pack at maaaring itago sa -25℃~-15℃ sa loob ng 18 buwan.Ito ay kinakailangan upang maiwasan ang malakas na pag-iilaw ng liwanag kapag nag-iimbak o naghahanda ng sistema ng reaksyon.

Pagtutukoy

Mga tagubilin

1. Sistema ng Reaksyon

[Tandaan]: Haluin nang maigi bago gamitin upang maiwasan ang labis na mga bula mula sa malakas na pagyanig.

a) konsentrasyon ng panimulang aklat: Ang panghuling konsentrasyon ng panimulang aklat ay 0.2μmol/L, at maaari ding isaayos sa pagitan ng 0.1 at 1.0μmol/L kung naaangkop.

b) Konsentrasyon ng template: Kung ang template ay undiluted na cDNA stock solution, ang volume na ginamit ay hindi dapat lumampas sa 1/10 ng kabuuang volume ng qPCR reaction.

c) Pagbabawas ng template: Inirerekomenda na palabnawin ang cDNA stock solution nang 5-10 beses.Ang pinakamainam na dami ng template na idinagdag ay mas mahusay kapag ang Ct value na nakuha sa pamamagitan ng amplification ay 20-30 cycle.

d) Sistema ng reaksyon: Inirerekomenda na gumamit ng 20μL o 50μL upang matiyak ang pagiging epektibo at repeatability ng target gene amplification.

e) Paghahanda ng system: Mangyaring maghanda sa napakalinis na bangko at gamitin ang mga tip at reaction tube na walang nuclease residue;inirerekumenda na gamitin ang mga tip na may mga filter na cartridge.Iwasan ang cross contamination at aerosol contamination.

2.Programa ng reaksyon

Pamantayang Programa

Mabilis na Programa

[Tandaan]: Ang mabilis na programa ay angkop para sa karamihan ng mga gene, at maaaring subukan ang mga karaniwang programa para sa mga indibidwal na kumplikadong pangalawang istrukturang gene.

a) Temperatura at oras ng pagsusubo: Mangyaring ayusin ayon sa haba ng primer at target na gene.

b) Fluorescence signal acquisition (★): Mangyaring itakda ang eksperimental na pamamaraan ayon sa mga kinakailangan sa mga tagubilin para sa paggamit ng instrumento.

c) Melting curve: Ang default na programa ng instrumento ay maaaring gamitin nang normal.

3. Pagsusuri ng Resulta 

Ang isang minimum na tatlong biological replicates ay kinakailangan para sa dami ng mga eksperimento.Pagkatapos ng reaksyon, kailangang kumpirmahin ang amplification curve at melting curve.

3.1 Amplification curve:

Ang karaniwang amplification curve ay S-shaped.Ang quantitative analysis ay pinakatumpak kapag ang Ct value ay bumaba sa pagitan ng 20 at 30. Kung ang Ct value ay mas mababa sa 10, ito ay kinakailangan upang palabnawin ang template at isagawa muli ang pagsubok.Kapag ang halaga ng Ct ay nasa pagitan ng 30-35, kinakailangan na dagdagan ang konsentrasyon ng template o ang dami ng sistema ng reaksyon, upang mapabuti ang kahusayan ng amplification at matiyak ang katumpakan ng pagsusuri ng resulta.Kapag ang halaga ng Ct ay mas malaki kaysa sa 35, ang mga resulta ng pagsubok ay hindi maaaring masuri sa dami ang pagpapahayag ng gene, ngunit maaaring magamit para sa pagsusuri ng husay.

3.2 Natutunaw na curve:

Ang nag-iisang rurok ng melting curve ay nagpapahiwatig na ang pagtitiyak ng reaksyon ay mabuti at ang quantitative analysis ay maaaring maisagawa;kung ang melting curve ay nagpapakita ng doble o maramihang mga taluktok, hindi maisagawa ang quantitative analysis.Ang melting curve ay nagpapakita ng mga dobleng taluktok, at ito ay kinakailangan upang hatulan kung ang non-target na peak ay primer dimer o hindi partikular na amplification ng DNA agarose gel electrophoresis.Kung ito ay isang primer dimer, inirerekumenda na bawasan ang konsentrasyon ng primer o muling idisenyo ang mga primer na may mataas na kahusayan sa amplification.Kung ito ay hindi partikular na amplification, mangyaring taasan ang temperatura ng pagsusubo, o muling idisenyo ang mga panimulang aklat nang may partikular na detalye.

Mga Tala

Mangyaring magsuot ng kinakailangang PPE, tulad ng lab coat at guwantes, upang matiyak ang iyong kalusugan at kaligtasan!

Ang produktong ito ay para sa paggamit ng pananaliksik LAMANG!