Rnase A
Ang Ribonuclease A (RNaseA) ay isang single-stranded polypeptide na naglalaman ng 4 na disulfide bond na may molecular weight na humigit-kumulang 13.7 kDa.Ang RNase A ay isang endoribonuclease na partikular na nagpapababa ng single-stranded RNA sa mga residue ng C at U.Sa partikular, kinikilala ng cleavage ang phosphodiester bond na nabuo ng 5′-ribose ng isang nucleotide at ang phosphate group sa 3′-ribose ng katabing pyrimidine nucleotide, upang ang 2, 3′-Cyclic phosphates ay hydrolyzed sa kaukulang 3 ′nucleoside phosphates (hal. pG-pG-pC-pA-pG ay pinuputol ng RNase A upang makabuo ng pG-pG-pCp at A-PG).Ang RNase A ay ang pinaka-aktibo sa pag-clear ng single-stranded RNA.Ang inirerekomendang konsentrasyon sa pagtatrabaho ay 1-100μG/mL, tugma sa iba't ibang sistema ng reaksyon.Ang mababang konsentrasyon ng asin (0-100 mM NaCl) ay maaaring gamitin upang i-cut ang single-stranded RNA, double-stranded RNA, at RNA chain na nabuo sa pamamagitan ng RNA-DNA hybridization.Gayunpaman, sa mataas na konsentrasyon ng asin (≥0.3 M), partikular na pinuputol lamang ng RNase A ang single-stranded na RNA.
Ang RNase A ay pinakakaraniwang ginagamit upang alisin ang RNA sa panahon ng paghahanda ng plasmid DNA o genomic DNA. Aktibo man o hindi ang DNase sa panahon ng proseso ng paghahanda ay madaling makakaapekto sa reaksyon.Ang tradisyunal na paraan ng pagpapakulo sa isang paliguan ng tubig ay maaaring gamitin upang hindi aktibo ang aktibidad ng DNase.Ang produktong ito ay hindi naglalaman ng DNase at protease, at hindi nangangailangan ng heat treatment bago gamitin.Bilang karagdagan, ang produktong ito ay maaari ding gamitin sa molecular biology na mga eksperimento tulad ng RNase protection analysis at RNA sequence analysis.
Mga Kondisyon sa Imbakan
Maaaring maimbak ang produkto sa -25～-15℃, may bisa sa loob ng 2 taon.
Mga tagubilin
Ito ay isa sa mga karaniwang pamamaraan para sa paghahanda ng solusyon sa imbakan ng RNase A.Maaari rin itong ihanda ngiba pang mga pamamaraan ayon sa mga tradisyonal na pamamaraan sa laboratoryo o sangguniang literatura (tulad ngdirektang natutunaw sa 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 o Tris-NaCl solution)
1. Gumamit ng 10 mM sodium acetate (pH 5.2) para maghanda ng 10 mg/mL ng RNase A storage solution
2. Pag-init sa 100 ℃ sa loob ng 15 min
3. Palamig sa temperatura ng silid, magdagdag ng 1/10 volume ng 1 M Tris-HCl (pH 7.4), ayusin ang pH nito sa 7.4 (para sahalimbawa, magdagdag ng 500 ml ng 10g/ml RNase storage solution 1M Tris-HCL, PH7.4)
4. Sub-packaged sa -20℃ para sa frozen na storage, na maaaring maging stable nang hanggang 2 taon.
[Mga Tala]: Kapag kumukulo ang solusyon sa RNaseA sa ilalim ng mga neutral na kondisyon, mabubuo ang pag-ulan ng RNase;Pakuluan ito sa mas mababang pH, at kung may pag-ulan, maaari itong obserbahan, na maaaring sanhi ng pagkakaroon ng mga dumi ng protina.Kung ang sediment ay matatagpuan pagkatapos kumukulo, ang mga dumi ay maaaring alisin sa pamamagitan ng high-speed centrifugation (13000rpm), at pagkatapos ay i-sub-pack para sa pagyeyelo na imbakan.
Impormasyon ng produkto
| Mga kasingkahulugan | Ribonuclease I;Pancreatic ribonuclease;Ribonuclease 3'-pyrimidnooligonucleotidohydrolase;Rnase A;Endoribonulcease I |
| Cas No. | 9001-99-4 |
| Hitsura | Puting lyophilized powder |
| Molekular na timbang | ~ 13.7kDa (sequence ng amino acid) |
| Halaga ng Ph | 7.6 (saklaw ng aktibidad 6-10) |
| Angkop na Temperatura | 60℃ (Saklaw ng aktibidad 15-70℃) |
| ahente ng pag-activate | Na2+.K+ |
| Inhibitor | Rnase Inhibitor |
| Paraan ng hindi aktibo | Hindi ma-inactivate sa pamamagitan ng pag-init, iminumungkahi na gumamit ng centrifuge column |
| Pinagmulan | baka |
| Solubility | Natutunaw sa tubig (10mg/ml) |
| Pagkawala sa tuyo | ≤5.0% |
| Aktibidad ng enzyme | ≥60 Kunitz units/mg |
| Isoelektrikong punto | 9.6 |
Mga Tala
Para sa iyong kaligtasan at kalusugan, mangyaring magsuot ng mga lab coat at disposable gloves para sa operasyon.
