Malakas na Taq DNA Polymerase

Ang Robustart Taq DNA Polymerase ay isang mainit na simula ng DNA polymerase.Ang produktong ito ay hindi lamang mas mahusay na makakapigil sa di-tiyak na reaksyon na dulot ng hindi tiyak na pagsusubo ng mga primer o primer na pagsasama-sama sa proseso ng paghahanda at pagpapalakas ng PCR system.Samakatuwid, ito ay may mahusay na pagtitiyak at mas epektibo para sa pagpapalaki ng mga template ng mababang konsentrasyon, at ito ay angkop para sa multiplexed na reaksyon ng amplification ng PCR.Bukod dito, ang produktong ito ay may napakahusay na applicability, at ang matatag na resulta ng amplification ay maaaring makuha sa iba't ibang uri ng mga reaksyon ng PCR.

Mga bahagi

1.5 U/μL Robustart Taq DNA polymerase

2.10 × PCR Buffer II (Mg²+ libre) (opsyonal)

3.25 mM MgCl₂(opsyonal)

* 10 × PCR Buffer II (Mg²+ libre) ay hindi naglalaman ng dNTP at Mg²+, mangyaring magdagdag ng mga dNTP at MgCl₂kapag inihahanda ang sistema ng reaksyon.

Inirerekomendang Aplikasyon

1.Mabilis na amplification.

2.Maramihang amplification.

3.Direktang pagpapalakas ng dugo, pamunas, at iba pang sample.

4.Pagtuklas ng mga sakit sa paghinga.

Kondisyon ng Imbakan

-20°C para sa pangmatagalang imbakan, dapat ihalo nang mabuti bago gamitin, iwasan ang madalas na freeze-thaw.

*Kung ang pag-ulan ay nangyayari pagkatapos ng pagpapalamig, ito ay normal;inirerekumenda na i-equilibrate sa temperatura ng silid bago ihalo at gamitin.

Kahulugan ng Yunit

Ang isang aktibong unit (U) ay tinukoy bilang ang dami ng enzyme na nagsasama ng 10 nmol ng deoxyribonucleotide sa acid-inoluble na materyal sa 74°C sa loob ng 30mins gamit ang activated salmon sperm DNA bilang template/primer.

Kontrol sa Kalidad

1.SDS-PAGE electrophoretic purity na higit sa 98%.

2.Pagkasensitibo ng amplification, kontrol ng batch-to-batch, katatagan.

3.Walang exogenous nuclease activity, walang exogenous endonuclease o exonuclease contamination

Mga tagubilin

Setup ng Reaksyon

Mga Tala:

1) a.Ang buffer ay hindi naglalaman ng dNTP at Mg²+, mangyaring magdagdag ng mga dNTP at MgCl₂kapag inihahanda ang sistema ng reaksyon.

2) b.Kung ginamit para sa qPCR/qRT-PCR, dapat idagdag ang fluorescent probes sa reaction system.Karaniwan, ang pangwakas na konsentrasyon ng primer na 0.2 μM ay magbibigay ng magagandang resulta;kung ang pagganap ng reaksyon ay mahina, ang konsentrasyon ng panimulang aklat ay maaaring iakma sa hanay na 0.2-1 μM.Ang konsentrasyon ng probe ay karaniwang na-optimize sa hanay na 0.1-0.3 μM.Maaaring isagawa ang mga eksperimento sa gradient ng konsentrasyon upang mahanap ang pinakamahusay na kumbinasyon ng panimulang aklat at probe.

Thermal cycling protocol

Mga Tala

1.Ang rate ng amplification ng mabilis na DNA polymerase ay hindi dapat mas mababa sa 1 kb/10 s.Ang rate ng pagtaas at pagbaba ng temperatura, mode ng pagkontrol sa temperatura at kahusayan ng pagpapadaloy ng init ng iba't ibang mga instrumento ng PCR ay malaki ang pagkakaiba-iba, kaya inirerekomenda na i-optimize ang pinakamainam na kondisyon ng reaksyon para sa partikular na instrumento ng mabilis na PCR.

2.Ang system ay lubos na madaling ibagay, na may mas mataas na pagtitiyak at pagiging sensitibo.

3.Angkop para sa paggamit bilang mataas na sensitivity PCR detection reagents, at maaaring gamitin sa multiplex PCR amplification reaksyon.

4.5′→3′ polymerase activity, 5′→3′ exonuclease activity;walang 3′→5′ exonuclease na aktibidad;walang proofreading function.

5.Angkop para sa qualitative at quantitative testing ng PCR at RT-PCR.

6.Ang 3′ dulo ng produkto ng PCR ay A, na maaaring direktang mai-clone sa isang T vector.

7.Ang tatlong-hakbang na paraan ay inirerekomenda para sa mga primer na may mababang temperatura ng pagsusubo o para sa pagpapalakas ng mga fragment na mas mahaba kaysa sa 200 bp.