Sensitibo sa Temperatura UNG
Ang Temperature Sensitive UNG (TS-UNG) ay nakuha sa pamamagitan ng recombinant na expression sa E. coli.Ang enzyme ay nagpapalabas ng libreng uracil mula sa uracil-containing single- at double-stranded DNA at hindi aktibo laban sa RNA.Kung ikukumpara sa conventional UNG enzyme ng E. coli gene origin, ang TS-UNG enzyme ay may mas mataas na aktibidad sa mababang temperatura (20 ℃~37 ℃) at sensitibo sa temperatura at madaling hindi aktibo (50 ℃), na iniiwasan ang pagkasira ng dUTP-containing amplification mga produkto sa temperatura ng silid sa pamamagitan ng natitirang aktibidad na maaaring manatili pagkatapos ng hindi aktibo ng maginoo na UNG enzyme.Samakatuwid, ang TS-UNG enzyme ay hindi lamang angkop para sa reaksyon ng pag-iwas sa kontaminasyon ng PCR, ngunit tumutugma din ito sa programa ng pagpapalakas ng RT-PCR at maaaring magamit sa reaksyon ng pag-iwas sa kontaminasyon ng RT-PCR.
Inirerekomendang Aplikasyon
Pagpapalakas ng Pag-iwas sa Kontaminasyon
Kondisyon ng Imbakan
-20°C para sa pangmatagalang imbakan, dapat ihalo nang mabuti bago gamitin, iwasan ang madalas na freeze-thaw.
Buffer ng imbakan
20 mM Tris-HCl (pH 7.5) , 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50% Glycerol.
Kahulugan ng Yunit
Ang dami ng enzyme na kinakailangan para i-degrade ang 1µg ng single-stranded DNA na naglalaman ng mga dU base sa 1 oras sa 37°C ay 1 unit ng aktibidad (U).
Kontrol sa Kalidad
1.SDS-PAGE electrophoretic purity na higit sa 98%
2.Aktibidad ng pagkasira, kontrol ng batch-to-batch, katatagan
3.Walang exogenous nuclease activity , walang exogenous endonuclease o exonuclease contamination.
Mga tagubilin
| Mga bahagi | Dami (μL) | Panghuling konsentrasyon |
| 10 × PCR Buffer (walang dNTP, Mg²+libre) | 5 | 1× |
| mga dUTP (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (palitan ang dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0.5 (0.1-0.5) | 0.5 U (0.1-0.5U) |
| 25 × Primer Mixa | 2 | 1× |
| Template | - | ＜1μg/reaksyon |
| ddH₂O | Hanggang 50 | - |
Tandaan: a: Kung ginamit para sa qPCR/qRT-PCR, dapat idagdag ang fluorescent probe sa reaction system.Karaniwan, ang pangwakas na konsentrasyon ng primer na 0.2 μM ay maaaring magbigay ng magagandang resulta;kapag ang pagganap ng reaksyon ay mahina, ang konsentrasyon ng panimulang aklat ay maaaring iakma sa hanay na 0.2-1 μM.Karaniwan, ang konsentrasyon ng probe ay na-optimize sa hanay na 0.1-0.3 μM.Maaaring isagawa ang mga eksperimento sa gradient ng konsentrasyon upang mahanap ang pinakamahusay na kumbinasyon ng panimulang aklat at probe.
Mga Tala
1.Ang pinakamainam na temperatura ng reaksyon ng TS-UNG enzyme ay medyo mababa, at maaari itong i-optimize sa hanay ng 20 ℃ ~ 37 ℃, ang dosis ng enzyme at ang oras ng reaksyon ay maaaring ma-optimize sa hanay na 0.1 ~ 0.5 U, 5~ 10 min;at ang enzyme ay maaaring ma-inactivate sa proseso ng reverse transcription.
2.Ito ay angkop para sa PCR at RT-PCR upang maiwasan ang kontaminasyon.
3.Iwasan ang madalas na freeze-thaw, at huwag ilantad sa malalaking pagbabago sa temperatura.
4.Ang iba't ibang mga gene na ipapalaki ay may iba't ibang kahusayan sa paggamit ng dUTP at sensitivity sa UNG enzyme, samakatuwid, kung ang paggamit ng UNG system ay humahantong sa pagbaba ng sensitivity ng pagtuklas, ang sistema ng reaksyon ay dapat ayusin at i-optimize, kung kailangan mo ng teknikal na suporta, mangyaring makipag-ugnay aming kompanya.
