Wild Taq DNA Polymerase
Ang Taq DNA Polymerase ay isang thermostable DNA polymerase mula sa Thermus aquaticus YT-1, na nagtataglay ng 5′→3′ polymerase activity at 5′ flap endonuclease na aktibidad.
Mga bahagi
| Component | HC1010A-01 | HC1010A-02 | HC1010A-03 | HC1010A-04 |
| 10× Taq Buffer | 2×1 mL | 2×10 ML | 2×50 ML | 5×200 ML |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0.1 mL | 1 mL | 5 mL | 5×10 mL |
Kondisyon ng Imbakan
Transportasyon sa ilalim ng 0°C at maiimbak sa -25°C~-15°C.
Kahulugan ng Yunit
Ang isang yunit ay tinukoy bilang ang dami ng enzyme na nagsasama ng 15 nmol ng dNTP sa acid insoluble na materyal sa loob ng 30 minuto sa 75°C.
Kontrol sa Kalidad
1.Protein Purity Assay (SDS-PAGE):Ang kadalisayan ng Taq DNA polymerase ay ≥95% na tinutukoy ng pagsusuri ng SDS-PAGE.
2.EndAktibidad ng onuclease:Ang minimum na 5 U ng Taq DNA polymerase na may 1 μg λDNA sa loob ng 16 na oras sa 37 ℃ ay nagreresulta sa walang nakikitang pagkasira gaya ng tinutukoy.
3.Aktibidad ng Exonuclease:Ang minimum na 5 U ng Taq DNA polymerase na may 1 μg λ -Hind Ⅲ digest DNA sa loob ng 16 na oras sa 37 ℃ ay nagreresulta sa walang nakikitang pagkasira gaya ng tinutukoy.
4.Aktibidad ng Nickase:Ang minimum na 5 U ng Taq DNA polymerase na may 1 μg pBR322 DNA sa loob ng 16 na oras sa 37°C ay nagreresulta sa walang nakikitang pagkasira gaya ng tinutukoy.
5.Aktibidad ng RNase:Ang minimum na 5 U ng Taq DNA polymerase na may 1.6 μg MS2 RNA sa loob ng 16 na oras sa 37°C ay nagreresulta sa walang nakikitang pagkasira gaya ng tinutukoy.
6.E. coliDNA:Ang 5 U ng Taq DNA polymerase ay na-screen para sa pagkakaroon ng E. coli genomic DNA gamit ang TaqMan qPCR na may mga panimulang tukoy para sa E. coli 16S rRNA locus.Ang E. coli genomic DNA contamination ay ≤1 Copy.
7.PCR Amplification (5.0 kb Lambda DNA)- Isang 50 µL na reaksyon na naglalaman ng 5 ng Lambda DNA na may 5 unit ng Taq DNA Polymerase para sa 25 cycle ng PCR amplification ay nagreresulta sa inaasahang 5.0 kb na produkto.
Setup ng Reaksyon
| Mga bahagi | Dami |
| Template ng DNAa | opsyonal |
| 10 μM Forward Primer | 1 μL |
| 10 μM Reverse Primer | 1 μL |
| dNTP Mix (10mM bawat isa) | 1 μL |
| 10×Taq Buffer | 5 μL |
| Taq DNA Polymeraseb | 0.25 μL |
| Tubig na walang nuclease | Hanggang sa 50 μL |
Mga Tala:
1) Ang pinakamainam na konsentrasyon ng reaksyon ng iba't ibang mga template ay iba.Ipinapakita ng sumusunod na talahanayan ang inirerekomendang paggamit ng template ng 50 µL reaction system.
| DNA | Halaga |
| Genomic | 1 ng-1 μg |
| Plasmid o Viral | 1 pg-1 ng |
2) Ang pinakamainam na konsentrasyon ng Taq DNA Polymerase ay maaaring mula sa 0.25 µL~1 µL sa mga espesyal na aplikasyon.
ReaksyonPrograma
| Hakbang | Temperatura(°C) | Oras | Mga cycle |
| Paunang denaturationa | 95 ℃ | 5mins | - |
| Denaturasyon | 95 ℃ | 15-30 s | 30-35 cycle |
| Pagsusupilb | 60 ℃ | 15 s | |
| Extension | 72 ℃ | 1kb/min | |
| Pangwakas na Extension | 72 ℃ | 5mins | - |
Mga Tala:
1) Ang paunang kondisyon ng denaturation ay angkop para sa karamihan ng mga reaksyon ng amplification at maaaring mabago ayon sa pagiging kumplikado ng istraktura ng template.Kung kumplikado ang istraktura ng template, ang oras bago ang denaturation ay maaaring pahabain sa 5 - 10mins upang mapabuti ang paunang epekto ng denaturation.
2) Ang temperatura ng pagsusubo ay kailangang isaayos ayon sa halaga ng Tm ng panimulang aklat, na karaniwang nakatakda sa 3~5 ℃ na mas mababa kaysa sa halaga ng Tm ng panimulang aklat;Para sa mga kumplikadong template, kinakailangan upang ayusin ang temperatura ng pagsusubo at pahabain ang oras ng extension upang makamit ang mahusay na amplification.
