2×HiF Taq plus Master Mix
Cat No: HCR2014B
Ang HIF Taq plus Master Mix (With Dye) ay isang ready-to-use 2×premixed solution na naglalaman ng Plus HIF DNA Polymerase, dNTPs, at optimized buffer.Dalawang monoclonal antibodies sa temperatura ng silid na pumipigil sa aktibidad ng polymerase at 3′→5′exonuclease na aktibidad ay idinagdag sa master mix para sa madali at lubos na tiyak na Hot Start PCR.Ang extension factor ay idinagdag sa master mix upang bigyan ang enzyme ng mahabang fragment amplification capacity, ang haba ng amplification ay maaaring hanggang 13 kb, ang enzyme ay may 5′→3′ DNA polymerase activity at isang 3′→5′ exonuclease activity, ang katapatan nito ay 83 beses kaysa sa Taq DNA polymerase, na 9 na beses kaysa sa ordinaryong DNA polymerase.Ito ay angkop para sa pagpapalakas ng mga kumplikadong mga template, ang produkto ng amplification ay isang mapurol na dulo.
Ang 2×HIF Taq plus Master Mix(With Dye) ay may mga pakinabang ng mabilis at madali, mataas na sensitivity, malakas na pagtitiyak, mahusay na katatagan, atbp., Ang sistema ng reaksyon ay kailangan lamang magdagdag ng mga primer at template, at maaaring palakihin ng dalawang- hakbang na protocol, pagpapasimple ng mga pang-eksperimentong hakbang at pagtitipid ng oras.Ang produktong ito ay naglalaman ng electrophoresis indicator dyes, at ang mga produktong PCR ay maaaring gamitin nang direkta para sa electrophoresis.Bilang karagdagan, ang produkto ay naglalaman din ng isang tiyak na ahente ng proteksyon, upang ang master mix ay mapanatili ang matatag na aktibidad pagkatapos ng paulit-ulit na freeze-thaw.
Mga Kondisyon sa Imbakan
Ang mga produkto ay dapat na nakaimbak sa -25~-15 ℃ sa loob ng 1 taon.
Mga pagtutukoy
| Produkto detalye | Master Mix |
| Konsentrasyon | 2× |
| Mainit na Simula | Built-in na Hot Start |
| Overhang | Mapurol |
| Bilis ng reaksyon | Mabilis |
| Sukat (Huling Produkto) | Hanggang 13kb |
| Mga kondisyon para sa transportasyon | Tuyong yelo |
| Uri ng produkto | High fidelity PCR premixes |
Mga tagubilin
1.Sistema ng Reaksyon ng PCR
| Mga bahagi | Dami (μL) |
| Template ng DNA | Angkop |
| Pasulong na panimulang aklat (10 μmol/L) | 2.5 |
| Baliktad na Primer (10 μmol/L) | 2.5 |
| 2×HIF Taq plus Master Mix | 25 |
| ddH2O | hanggang 50 |
2.Inirerekomenda ang paggamit ng iba't ibang mga template
| Uri ng template | Palakihin ang mga fragment mula 1kb hanggang 10 kb |
| Genomic DNA | 50ng-200 ng |
| Plasmid o Viral DNA | 10pg-20ng |
| cDNA | 1-2.5 µL (Huwag lumampas sa 10% ng huling dami ng reaksyon ng PCR) |
3.Protokol ng Amplification
1) Two-Step Protocol (complexity template)
| Ikot ng hakbang | Temp. | Oras | Mga cycle |
| Paunang denaturation | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturasyon | 98 ℃ | 10seg | 30-35 |
| Extension | 68 ℃ | 30 seg/kb | |
| Panghuling extension | 72 ℃ | 5 min | 1 |
2) Three-Step Protocol (regular na protocol)
| Ikot ng hakbang | Temp. | Oras | Mga cycle |
| Paunang denaturation | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturasyon | 98 ℃ | 10seg | 30-35 |
| Pagsusupil | 60 ℃ | 20 seg | |
| Extension | 72 ℃ | 30 seg/kb | |
| Panghuling extension | 72 ℃ | 5 min | 1 |
3) Annealing Gradient Protocol (complexity template)
| Ikot ng hakbang | Temperatura | Oras | Mga cycle |
| Paunang denaturation | 98 ℃ | 3 min | 1 |
| Denaturasyon | 98 ℃ | 10 seg | 15 (1 ℃ pagbabawas bawat cycle) |
| Gradient na pagsusubo | 70-55 ℃ | 20 seg | |
| Extension | 72 ℃ | 30 seg/kb | |
| Denaturasyon | 98 ℃ | 10 seg |
20 |
| Pagsusupil | 55 ℃ | 20 seg | |
| Extension | 72 ℃ | 30 seg/kb | |
| Panghuling extension | 72 ℃ | 5 min | 1 |
Mga tampok sa ilalim ng iba't ibang amplification protocol
| Protocol | Dalawang hakbang | Tatlong hakbang | Gradient na pagsusubo |
| Spec. | mabilis | daluyan | mabagal |
| Pagtitiyak | mataas | daluyan | mataas |
| PCR yield | daluyan | mataas | daluyan |
| Rate ng pagtuklas | mataas | daluyan | mataas |
Mga Tala
Mangyaring magsuot ng kinakailangang PPE, tulad ng lab coat at guwantes, upang matiyak ang iyong kalusugan at kaligtasan!
