Isang Hakbang RT-qPCR SYBR Green Premix
Cat No: HCB5140A
Ang One Step RT-qPCR Syber Green Premix ay para sa fluorescence quantification batay sa SYBR Green I dye.Gamit ang mga primer na partikular sa gene, ang reverse transcription at mga reaksyon ng qPCR ay nakumpleto sa isang tubo, na inaalis ang pangangailangan para sa paulit-ulit na pagbubukas ng cap at pipetting na mga operasyon, na lubos na nagpapahusay sa kahusayan ng assay at binabawasan ang panganib ng kontaminasyon.Para sa mga sample ng RNA, ang kit ay gumagamit ng heat-resistant Reverse Transcriptase para sa mahusay na cDNA synthesis at HotStart Taq DNA Polymerase para sa quantitative amplification.Sa ilalim ng na-optimize na buffer system, ang sensitivity ng kit ay maaaring kasing taas ng 0.1 pg para sa mataas na ipinahayag na mga target at kasing taas ng 1 pg para sa moderately expressed na mga target.Ang kit ay angkop para sa amplification at quantification ng mga sample ng DNA.Nagbibigay-daan ito sa sensitibong pagtuklas at pag-quantification ng mga nucleic acid mula sa iba't ibang sample ng halaman at hayop, mga cell at microorganism.
Mga bahagi
| No | Pangalan | Dami | Dami |
| 1 | Advanced na Buffer | 250 μL | 2×1.25 mL |
| 2 | Advanced na Enzyme Mix | 20 μL | 200 μL |
| 3 | RNase Free H2O | 250 μL | 2×1.25 mL |
Mga Kondisyon sa Imbakan
Ang produktong ito ay dapat na nakaimbak sa -25~-15 ℃ ang layo mula sa liwanag sa loob ng 1 taon.
Mga tagubilin
1.Reaction system configurationd
| Mga bahagi | Dami (μL) | Dami (μL) | Panghuling konsentrasyon |
| Advanced na Buffer | 12.5 | 25 | 1× |
| Advanced na Enzyme Mix | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0.2 μmol/L |
| Baliktad na Primer (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0.2 μmol/L |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| RNase Free H2Oc | hanggang 25 | hanggang 50 | - |
Mga Tala:
1) a.Tang panghuling konsentrasyon ng primer ay 0.2 μmol/L, na maaari ding iakma sa pagitan ng 0.1 at 1μmol/L kung naaangkop.
2) b.Ang reagent ay sobrang sensitibo, na may Kabuuang RNA sa hanay na 1pg-1μg, at ang pagsubok sa mga sample ng tao ay nagpakita ng pinakamainam na input na 1 pg-100 ng, na kinokontrol para sa isang pangkalahatang halaga ng Ct sa hanay na 15-30 kung naaangkop.
3) c.Inirerekomenda na gumamit ng 20μL o 50μL upang matiyak ang bisa at muling paggawa ng target na gene amplification.
4) d.Mangyaring maghanda sa ultra-clean na bangko at gumamit ng mga nuclease residue-free na tip at reaction tubes;inirerekomenda ang mga tip na may mga filter na cartridge.Iwasan ang cross contamination at aerosol contamination.
2.Programa ng reaksyon
| Ikot ng hakbang | Temp. | Oras | Mga cycle |
| Baliktad na transkripsyon | 50 ℃a | 6mins | 1 |
| Paunang denaturation | 95 ℃ | 5mins | 1 |
| Reaksyon ng amplification | 95 ℃ | 15 seg | 40 |
| 60 ℃b | 30 seg | ||
| Stage ng natutunaw na curve | Mga Default ng Instrumento | 1 | |
Mga Tala:
1) a.Maaaring piliin ang reverse transcription temperature sa pagitan ng 50-55°C ayon sa mga pang-eksperimentong pangangailangan.Para sa mga sample ng DNA, maaaring tanggalin ang reverse transcription process.
2) b.Sa mga espesyal na kaso, ang temperatura ng annealing/extension ay maaaring iakma ayon sa panimulang halaga ng Tm, 60°C ang inirerekomenda.
Mga Tala
1. Ang produktong ito ay para lamang sa paggamit ng pananaliksik.
2. Mangyaring magpatakbo gamit ang mga lab coat at disposable gloves, para sa iyong kaligtasan.
