Rnase Inhibitor (Walang gliserol)
Ang Murine RNase inhibitor ay isang recombinant murine RNase inhibitor na ipinahayag at nalinis mula sa E.coli.Ito ay nagbubuklod sa RNase A, B o C sa isang ratio na 1:1 sa pamamagitan ng non-covalent bonding, sa gayon ay pinipigilan ang aktibidad ng tatlong enzyme at pinoprotektahan ang RNA mula sa pagkasira.Gayunpaman, hindi ito epektibo laban sa RNase 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H o RNase mula sa Aspergillus.Ang Murine RNase inhibitor ay sinubukan ng RT-PCR, RT-qPCR at IVT mRNA, at katugma sa iba't ibang komersyal na Reverse transcriptases, DNA polymerases at RNA polymerases.
Kung ikukumpara sa mga inhibitor ng RNase ng tao, ang murine RNase inhibitor ay hindi naglalaman ng dalawang cysteinees na lubos na sensitibo sa oksihenasyon na nagiging sanhi ng hindi aktibo ng inhibitor.Na ginagawa itong matatag sa mababang konsentrasyon ng DTT (mas mababa sa 1 mM).Ginagawa nitong angkop ang feature na ito para gamitin sa mga reaksyon kung saan ang mataas na konsentrasyon ng DTT ay masama sa reaksyon (hal. Real-time na RT-PCR).
Application
Ang produktong ito ay maaaring malawakang gamitin sa anumang eksperimento kung saan posible ang interference ng RNase upang maiwasan ang pagkasira ng RNA, gaya ng:
1.First-strand cDNA synthesis, RT-PCR, RT-qPCR, atbp.;
2. Protektahan ang RNA mula sa pagkasira sa in-vitro transcription/translation (hal. viral replication in vitro);
3. Pagpigil sa aktibidad ng RNase sa panahon ng paghihiwalay at paglilinis ng RNA.
Mga Kondisyon sa Imbakan
Mag-imbak sa -25～-15℃;
Mga cycle ng freeze-thaw ≤ 5 beses;
May bisa sa loob ng 1 taon.
Depinisyon ng yunit
Ang isang yunit ay tinukoy bilang ang halaga ng RNase Inhibitor na kinakailangan upang pagbawalan ang aktibidad ng 5 ng RNase A ng 50%.
Molekular na timbang
Ang RNase Inhibitor (Glycerol-free) ay isang 50 kDa na protina.
Kontrol sa kalidad
Exonuclease Aktibidad:
Ang incubation ng 40 U ng enzyme na may 1 μg λ-Hind III digest DNA sa loob ng 16 na oras sa 37°C ay nagresulta sa walang detectable degradation ng DNA gaya ng tinutukoy ng gel electrophoresis.
Aktibidad ng Endonuclease:
Ang incubation ng 40 U ng enzyme na may 1 μg λ DNA sa loob ng 16 na oras sa 37°C ay nagresulta sa walang nakikitang pagkasira ng DNA na tinutukoy ng gel electrophoresis.
Nicking Aktibidad:
Ang incubation ng 40 U ng enzyme na may 1 μg pBR322 sa loob ng 16 na oras sa 37 ℃ ay nagresulta sa walang nakikitang pagkasira ng DNA gaya ng tinutukoy ng gel electrophoresis.
RNase Aktibidad:
Ang incubation ng 40 U ng enzyme na may 1.6 μg MS2 RNA sa loob ng 4 na oras sa 37 ℃ ay nagresulta sa walang nakikitang pagkasira ng RNA na tinutukoy ng gel electrophoresis.
E.coli DNA:
40 U ng Enzyme ay nakita ng TaqMan qPCR.Ang E.coli DNA ay ≤ 0. 1pg/40U.
Notes
1. Huwag kalugin o pukawin nang marahas upang maiwasan ang hindi aktibo na enzyme.
2. Ang RNase inhibitor ay aktibo sa mga temperaturang mula 25 ℃ hanggang 55 ℃ at hindi aktibo sa ≥65 ℃.
3. Ang aktibidad ng RNase H, RNase 1, at RNase T1 ay hindi pinipigilan.
4. Malawak ang hanay ng pH para sa pagpigil sa aktibidad ng RNase (aktibo sa pH 5-9), na nagpapakita ng pinakamataas na aktibidad sa pH 7-8.
