UDG/UNG Enzymes
Maaaring catalyze ng UDG(uracil DNA glycosylase) ang hydrolysis ng N-glycosidic link sa pagitan ng uracil base at ng sugar-phosphate backbone sa ssDNA at dsDNA.Madali nitong makokontrol ang polusyon ng aerosol at angkop para sa mga karaniwang molecular biology system tulad ng PCR, qPCR, RT-qPCR at LAMP.
Mga pagtutukoy
| Expression Host | Recombinant E. coliwith uracil DNA glycosylase gene |
| Molekular na Timbang | 24. 8kDa |
| Kadalisayan | ≥95% (SDS-PAGE) |
| Hindi Aktibidad ng init | 95℃, 5~10 min |
| Kahulugan ng Yunit | Ang isang unit (U) ay tinukoy bilang ang dami ng enzyme na kinakailangan upang ma-catalyze ang hydrolysis ng l μg dU na naglalaman ng dsDNA sa loob ng 30 minuto sa 25 ℃. |
Imbakan
Ang produkto ay dapat na naka-imbak sa-25℃~-15°C sa loob ng dalawang taon.
Mga tagubilin
1.Paghahanda ng PCR reaction mixture ayon sa sumusunod na sistema
| Mga bahagi | Dami (μL) | Panghuling konsentrasyon |
| 10×PCR Buffer (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1.5 mmol/L |
| dUTP(10 mmol/L) | 3 | 0.6 mmol/L |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP(10mmol/Leach) | 1 | 0.2 mmol/Leach |
| Template ng DNA | X | - |
| Primer1 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| Primer 2 (10μmol/L) | 2 | 0.4 μmol/L |
| Taq DNA Polymerase (5 U/μL) | 0. 5 | 0. 05 U/μL |
| Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), 1 U/μL | 1 | 1 U/μL |
| ddH₂O | Hanggang 50 | - |
Tandaan: Ayon sa mga pang-eksperimentong kinakailangan, ang panghuling konsentrasyon ng dUTP ay maaaring iakma sa pagitan ng 0.2-0.6 mmol/L, at 0.2 mmol/L dTTP ay maaaring idagdag nang pili.
2.Pamamaraan ng amplification
| Ikot ng hakbang | Temperatura | Oras | Mga cycle |
| pagkasira ng template na naglalaman ng dU | 25 ℃ | 10mins | 1 |
| Pag-activate ng UDG, paunang denaturation ng template | 95 ℃ | 5~10mins | 1 |
| Denaturasyon | 95 ℃ | 10 seg |
30-35 |
| Pagsusupil | 60 ℃ | 20 seg | |
| Extension | 72 ℃ | 30sec/kb | |
| Panghuling extension | 72 ℃ | 5 min | 1 |
Tandaan: Ang oras ng reaksyon sa 25°C ay maaaring iakma sa loob ng 5-10mins ayon sa mga pang-eksperimentong kinakailangan.
Mga Tala
1.Aktibo ang UDG sa karamihan ng mga buffer ng reaksyon ng PCR.
2.Ang mga enzyme ay dapat na nakaimbak sa isang icebox o sa isang ice bath kapag ginamit, at dapat na nakaimbak sa-20°C kaagad pagkatapos gamitin.
3.Mangyaring magsuot ng kinakailangang PPE, tulad ng lab coat at guwantes, upang matiyak ang iyong kalusugan at kaligtasan!
