RT-LAMP Colormetric Master Mix HCB5204A
Ang produktong ito ay naglalaman ng reaction buffer, RT-Enzymes Mix (Bst DNA polymerase at heat-resistant reverse transcriptase), lyophilized Protectants at mga bahagi ng chromogenic dye.Upang gamitin, gamitin lamang ang Buffer, ang reaction enzyme at primer ay pinaghalo at idinagdag sa template;ang pagdaragdag ng lyophilized protectant ay maaaring tuwid.Ito ay konektado sa isang lyophilizer at lyophilized, at ang mga primer at template lamang ang idinagdag kapag ginamit.Ang kit na ito ay nagbibigay ng mabilis, malinaw na visual detection ng amplification, kung saan ang negatibong reaksyon ay ipinahiwatig sa pula at ang positibong reaksyon ay ipinapahiwatig ng pagbabago sa dilaw.
Component
| Component | HCB5204A-01 | HCB5204A-02 | HCB5204A-03 |
| Loop-mediated Amplification Buffer (may dye) | 0.96 ML | 4.80 mL×2 | 9.60 mL×10 |
| RT-Enzymes Mix | 270 μL | 2.70 ML | 2.70 mL×10 |
| Lyophilized protectant | 0.96 mL×2 | 9.60 mL×2 | 9.60 mL×20 |
Mga aplikasyon
Para sa DNA o RNA isothermal amplification.
Mga Kondisyon sa Imbakan
Dinala gamit ang Dry ice, na nakaimbak sa -25~ -15℃.Iwasan ang madalas na freeze-thaw, ang produkto ay may bisa sa loob ng 12 buwan.
Protocol
1.I-thaw ang reaction buffer na gagamitin sa room temperature.Vortex sandali o baligtarin ang mga tubo ng ilang beses upang ihalo nang maigi, pagkatapos ay i-centrifuge upang kolektahin ang likido sa ilalim ng tubo.
2.Paghahanda ng sistema ng reaksyon.Ang reagent na ito ay maaaring ihanda sa dalawang sistema ng reaksyon, paghahalo ng reaksyon ng likido at paghahalo ng lyophilized system.
1) Maghanda ng likidong paghahalo ng reaksyon
| Component | Dami |
| Loop-mediated Amplification Buffer (may dye) | 10 μL |
| RT-Enzymes Mix | 2.8 μL |
| 10 × Primer Mixa | 5 μL |
| Mga template ng DNA/ RNA b | × μL |
| Tubig na walang nuclease | Hanggang sa 50 μL |
2) Halo ng sistema ng Lyophilization
① Maghanda ng lyophilized mix
| Component | Dami |
| Loop-mediated Amplification Buffer (may dye) | 10 μL |
| Lyophilized protectant | 20 μL |
| RT-Enzymes Mix | 2.8 μL |
| Tubig na walang nuclease | Hanggang sa 50 μL |
② Lyophilization: Ang inihandang Mix ay na-lyophilize sa isang 50μL system
③ Maghanda ng reaction mix
| Component | Dami |
| Lyophilized na halo | 1 piraso |
| 10 × Primer Mixa | 5 μL |
| Mga template ng DNA/ RNA b | × μL |
| Tubig na walang nuclease | Hanggang sa 50 μL |
Mga Tala:
1) a.10×Primer Mix : 16 μM FIP/BIP, 2 μM F3/B3, 4 μM Loop F/B;
2) b.Ang DEPC (nalulusaw sa tubig) ay inirerekomenda para sa nucleic acid templ.
1.I-incubate sa 65°C sa loob ng 30-45mins, na maaaring palawigin nang naaangkop ayon sa pagbabago ng kulay Reaction time.
2.Ayon sa mata, ang dilaw ay positibo at ang pula ay negatibo.
Mga Tala
1.Maaaring lumitaw ang asin sa ilalim ng buffer tube, puyo ng tubig saglit o baliktarin ang mga tubo ng ilang beses upang ihalo nang maigi sa temperatura ng silid.
2.Ang temperatura ng reaksyon ay maaaring i-optimize sa pagitan ng 62 ℃ at 68 ℃ ayon sa kondisyon ng mga primer.
3.Ang mga nakabalot na reagents ay hindi dapat malantad sa hangin sa loob ng mahabang panahon.
4.Ang red at yellow discoloration reaction ay depende sa pagbabago ng pH ng reaction system, mangyaring huwag gamitin ang naglalaman ng Tris nucleic acid storage solution, inirerekomenda na gumamit ng ddH2O nakaimbak na nucleic acid;
5.Dapat na istandardize ang eksperimento, kabilang ang paghahanda ng sistema ng reaksyon, lyophilization, at pagpoproseso ng sample at proseso ng pagdaragdag ng sample;
6.Upang maiwasan ang kontaminasyon, inirerekumenda na ihanda ang sistema ng reaksyon sa isang napakalinis na bangko, sa iba pang Magdagdag ng mga template sa fume hood ng silid upang maiwasan ang maling positibong interference.
