Multiplex qPCR Probe Premix
Cat No: HCB5051A
Ang TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) ay isang pre-solution para sa 2 × real-time na quantitative PCR amplification na nailalarawan sa pamamagitan ng mataas na sensitivity at specificity, na kulay asul, at may epekto ng sample na karagdagan.Ang produktong ito ay isang 2× Mix pre-mixed reagent na nagbibigay-daan sa hanggang apat na fluorescent quantitative PCR reactions sa isang solong reaction well.Ang produktong ito ay naglalaman ng genetically modified antibody method para sa hot-start na Taq enzyme, na lubos na nagpapabuti sa sensitivity at specificity ng amplification.Kasabay nito, malalim na na-optimize ng produktong ito ang multi-reaction buffer, na maaaring mapabuti ang kahusayan ng amplification ng reaksyon at i-promote ang epektibong amplification ng mga template na mababa ang konsentrasyon.Maaaring gamitin ang produktong ito para sa genotyping at multiplex quantitative analysis.
Pagtutukoy
| Mainit na Simula | Built-in na mainit na simula |
| Paraan ng pagtuklas | Pagtuklas ng primer-probe |
| Paraan ng PCR | qPCR |
| Polymerase | Taq DNA polymerase |
| Uri ng sample | DNA |
Mga Kondisyon sa Imbakan
Ang produkto ay ipinadala na may tuyong yelo at maaaring iimbak sa -25~-15 ℃ sa loob ng 2 taon.
Mga tagubilin
1. ReaksyonSistema
| Mga bahagi | Dami (μL) | Pangwakas na Konsentrasyon |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Primer mix (10 μmol/L) a | × | 0.1 - 0.5 μmol/L |
| Probe mix (10 μmol/L)b | × | 50 - 250 nmol/L |
| Rox reference dye | 0.5 | 1× |
| Template DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | hanggang 25 | - |
Mga Tala:Haluing mabuti bago gamitin upang maiwasan ang labis na mga bula mula sa malakas na pagyanig.
a.Primer concentration: Ang Primer Mix ay naglalaman ng maraming pares ng mga primer, kadalasan ang bawat primer ay nasa huling konsentrasyon na 0.2 μmol/L at maaari ding isaayos sa pagitan ng 0.1 at 0.5 μmol/L kung naaangkop.
b.Konsentrasyon ng Probe: Ang Probe Mix ay naglalaman ng maraming probe na may iba't ibang fluorescence signal, at ang konsentrasyon ng bawat probe ay maaaring iakma sa pagitan ng 50 at 250 nmol/L ayon sa partikular na sitwasyon.
1.Rox dye reference:Ginagamit ito sa Real Time PCR amplification instrument gaya ng Applied Biosystems para itama ang error ng fluorescence signal na nabuo sa pagitan ng mga balon;ang produktong ito ay hindi naglalaman ng Rox dye reference.Inirerekomenda ang Cas#10200 kung kinakailangan.
2.Pagbabawas ng template: Ang qPCR ay lubos na sensitibo, at inirerekumenda na palabnawin ang template para magamit.Kung ang template ay isang cDNA stock solution, ang template volume ay hindi dapat lumampas sa 1/10 ng kabuuang volume.
3.Reaction system: Inirerekomenda ang 25μL,30μL o 50μL para matiyak ang pagiging epektibo at repeatability ng target gene amplification.
4.Paghahanda ng system: Mangyaring maghanda sa napakalinis na bangko, at gamitin ang mga tip at reaction tube na walang nuclease residue;inirerekumenda na gamitin ang mga tip na may mga filter na cartridge.Iwasan ang cross contamination at aerosol contamination.
2.Programa ng reaksyon
| Ikot ng hakbang | Temp. | Oras | Mga cycle |
| Inisyal-denaturasyon | 95 ℃ | 5mins | 1 |
| Denaturasyon | 95 ℃ | 15seg | 45 |
| Pagsusuri/Pagpapalawig | 60 ℃ | 30seg |
Mga Tala:
1.Pagsusupil/Pagpapalawig: Ang temperatura at oras ay maaaring naaangkop na iakma ayon sa idinisenyong panimulang halaga ng Tm.
2.Pagkuha ng signal ng fluorescence: Ang oras ng pagkuha ng fluorescence signal na kinakailangan para sa iba't ibang instrumento sa pagtukoy ng qPCR ay iba, mangyaring itakda ayon sa minimum na limitasyon sa oras.Ang oras ng ilang karaniwang mga instrumento ay itinakda tulad ng sumusunod:
20 segundo: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 segundo: Applied Biosystems 7300
32 segundo: Applied Biosystems 7500
Mga Tala
Mangyaring magsuot ng kinakailangang PPE, tulad ng lab coat at guwantes, upang matiyak ang iyong kalusugan at kaligtasan!
