Isang Hakbang Mabilis RT-qPCR Probe Premix-UNG
Cat No: HCR5143A
Ang One Step RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) ay isang probe-based RT-qPCR fast detection kit na angkop para sa single-plex o multiplex quantitative PCR gamit ang RNA bilang template (gaya ng RNA virus).Gumagamit ang produktong ito ng bagong henerasyon ng Taq DNA Polymerase na binago ng antibody at isang hakbang na nakatuon sa Reverse Transcriptase, na may na-optimize na buffer para sa mabilis na amplification, na may mas mabilis na bilis ng amplification, mas mataas na kahusayan sa amplification at specificity.Sinusuportahan nito ang balanseng amplification sa parehong single-plex at multiplex ng mababa at mataas na mga sample ng konsentrasyon sa maikling panahon.
Mga bahagi
1. 5×RT-qPCR buffer (U+)
2. Enzyme mix (U+)
Mga Tala:
a.Kasama sa 5×RT-qPCR buffer (U+) ang dNTP at Mg2+;
b.Kasama sa enzyme mix (U+) ang reverse transcriptase, Hot Start Taq DNA polymerase, RNase inhibitor at UDG;
c.Gumamit ng mga tip sa RNase-Free, EP tubes, atbp.
Bago gamitin, ihalo nang husto ang 5×RT-qPCR buffer (U+).Kung mayroong anumang pag-ulan pagkatapos ng lasaw, hintayin ang buffer na bumalik sa temperatura ng silid, paghaluin at matunaw, at pagkatapos ay gamitin ang mga ito nang normal.
Mga Kondisyon sa Imbakan
Ang produkto ay ipinadala na may tuyong yelo at maaaring itago sa -25~-15 ℃ sa loob ng 1 taon.
Mga tagubilin
1. Reaksyon Sistema
| Mga bahagi | Dami (20 μL reaksyon) |
| 2 ×RT-qPCR buffer | 4μL |
| Halo ng enzyme (U+) | 0.8μL |
| Primer Forward | 0.1~ 1.0μM |
| Baliktad ng Primer | 0.1~ 1.0μM |
| TaqMan Probe | 0.05~0.25μM |
| Template | X μL |
| Tubig na Walang RNase | hanggang sa 25μL |
Mga Tala: Ang dami ng reaksyon ay 10-50μL.
2. Cycling Protocol (Standard)
| Ikot hakbang | Temp. | Oras | Mga cycle |
| Baliktad na Transkripsyon | 55 ℃ | 10 min | 1 |
| Paunang Denaturasyon | 95 ℃ | 30 seg | 1 |
| Denaturasyon | 95 ℃ | 10 seg | 45 |
| Pagsusuri/Pagpapalawig | 60 ℃ | 30 seg |
| Protocol ng Pagbibisikleta (Mabilis) Ikot hakbang |
Temp. |
Oras |
Mga cycle |
| Baliktad na Transkripsyon | 55 ℃ | 5 min | 1 |
| Paunang Denaturasyon | 95 ℃ | 5 s | 1 |
| Denaturasyon | 95 ℃ | 3 s | 43 |
| Pagsusuri/Pagpapalawig | 60 ℃ | 10 s |
Mga Tala:
a.Ang reverse transcription temperature ay nasa pagitan ng 50 ℃ hanggang 60 ℃, ang pagtaas ng temperatura ay nakakatulong na palakasin ang mga kumplikadong istruktura at mataas na CG na mga template ng nilalaman;
b.Ang pinakamainam na temperatura ng annealing ay kailangang isaayos batay sa Tm value ng primer, at piliin ang pinakamaikling oras para sa pagkolekta ng fluorescence signal batay sa Real Time PCR instrument.
Mga Tala
Mangyaring magsuot ng kinakailangang PPE, tulad ng lab coat at guwantes, upang matiyak ang iyong kalusugan at kaligtasan!
