CHO HCP ELISA Kit
Isang One-step immunosorbent ELISA method ang ginagamit sa assay na ito.Ang mga sample na naglalaman ng CHOK1 HCP ay sabay-sabay na tumutugon sa HRP-labeled goat anti-CHOK1 antibody at anti-CHOK1 antibody na pinahiran sa ELISA plate, na sa wakas ay bumubuo ng sandwich complex ng solid-phase antibody-HCP-labeled antibody.Maaaring alisin ang unbound antigen-antibody sa pamamagitan ng paghuhugas ng ELISA plate.Ang TMB substrate ay idinagdag sa balon para sa sapat na reaksyon.Ang pagbuo ng kulay ay itinigil pagkatapos idagdag ang stop solution, at ang OD o absorbance value ng reaction solution sa 450/650nm ay binabasa gamit ang microplate reader.Ang halaga ng OD o halaga ng pagsipsip ay proporsyonal sa nilalaman ng HCP sa solusyon.Mula dito, ang konsentrasyon ng HCP sa solusyon ay maaaring kalkulahin ayon sa karaniwang curve.
Aplikasyon
Ang kit na ito ay ginagamit upang matukoy ang dami ng nilalaman ng CHOK1 host cell protein residues sa mga sample.
Cmga kalaban
| S/N | Component | Konsentrasyon | Mga Kondisyon sa Imbakan |
| 1 | CHOK1 HCP Standard | 0.5mg/mL | ≤–20 ℃ |
| 2 | Anti-CHO HCP-HRP | 0.5mg/mL | ≤–20 ℃, protektahan mula sa liwanag |
| 3 | TMB | NA | 2-8 ℃, protektahan mula sa liwanag |
| 4 | 20 × PBST 0.05% | NA | 2-8 ℃ |
| 5 | Itigil ang solusyon | NA | RT |
| 6 | Mga microplate sealers | NA | RT |
| 7 | BSA | NA | 2-8 ℃ |
| 8 | Mataas na adsorption pre-coating Plate | NA | 2-8 ℃ |
Kinakailangan ang Kagamitan
| Mga Consumable / Kagamitan | Paggawa | Catalog |
| Microplate reader | Mga Molecular Device | Spectra Max M5, M5e, o katumbas nito |
| Thermomixer | Eppendorf | Eppendorf/5355, o katumbas nito |
| Vortex mixer | IKA | MS3 Digital, o katumbas |
Imbakan at katatagan
1.Transport sa -25~-15°C.
2.Ang mga kondisyon ng imbakan ay tulad ng ipinapakita sa Talahanayan 1;ang mga bahagi 1-2 ay nakaimbak ≤–20°C, 5-6 ay nakaimbak RT,3,4、7、8 ay naka-imbak sa 2-8 ℃;ang panahon ng bisa ay 12 buwan.
Mga parameter ng produkto
1.Sensitivity: 1ng/mL
2.Saklaw ng pagtuklas:3- 100ng/mL
3.Katumpakan: Intra-assay CV≤ 10%, inter-assay CV≤ 15%
4.Saklaw ng HCP: >80%
5.Pagtutukoy: Ang kit na ito ay pangkalahatan dahil ito ay partikular na tumutugon sa CHOK1 HCP na hindi nakasalalay sa proseso ng paglilinis.
Paghahanda ng reagent
1.PBST 0.05%
Kumuha ng 15 ml ng 20×PBST 0.05%, diluted sa ddH2O, at binubuo ng hanggang 300 ML.
2.1.0% BSA
Kumuha ng 1g ng BSA mula sa bote at palabnawin sa 100 ml ng PBST 0.05%, haluing mabuti hanggang sa ganap na matunaw, at mag-imbak sa 2-8°C.Ang inihandang dilution buffer ay may bisa sa loob ng 7 araw.Inirerekomenda na maghanda kung kinakailangan.
3.Solusyon sa pagtuklas 2μg/mL
Kumuha ng 48μL ng 0.5 mg/mL Anti-CHO HCP-HRP at maghalo sa 11,952μL ng 1% BSA upang makakuha ng panghuling konsentrasyon ng 2μg/mL detection solution.
4.QC at Paghahanda ng CHOK1 HCP Standards
| tubo Hindi. | Orihinal | Konsentrasyon | Dami | 1%BSA | kabuuang Dami | Pangwakas |
| A | Pamantayan | 0.5mg/mL | 10 | 490 | 500 | 10,000 |
| B | A | 10,000 | 50 | 450 | 500 | 1,000 |
| S1 | B | 1.000 | 50 | 450 | 500 | 100 |
| S2 | S1 | 100 | 300 | 100 | 400 | 75 |
| S3 | S2 | 75 | 200 | 175 | 375 | 40 |
| S4 | S3 | 40 | 150 | 350 | 500 | 12 |
| S5 | S4 | 12 | 200 | 200 | 400 | 6 |
| S6 | S5 | 6 | 200 | 200 | 400 | 3 |
| NC | NA | NA | NA | 200 | 200 | 0 |
| QC | S1 | 100 | 50 | 200 | 250 | 20 |
Talahanayan: Paghahanda ng QC at Pamantayan
Pamamaraan ng Pagsusuri
1.Ihanda ang mga reagents gaya ng ipinahiwatig sa “Reagent Preparation” sa itaas.
2.Kumuha ng 50μL ng mga pamantayan, sample at QC (sumangguni sa Talahanayan 3) sa bawat balon, pagkatapos ay magdagdag ng 100μL ng Detection solution (2μg/mL);Takpan ang plato gamit ang sealer, at ilagay ang ELISA plate sa thermomixer.I-incubate sa 500rpm, 25±3℃ sa loob ng 2 oras.
3.Baligtarin ang microplate sa lababo at itapon ang solusyon sa patong.Pipette ng 300μL ng PBST 0.05% sa bawat balon upang hugasan ang ELISA plate at itapon ang solusyon, at ulitin ang paghuhugas ng 3 beses.Baligtarin ang plato sa isang malinis na tuwalya ng papel at patuyuin.
4.Magdagdag ng 100μL ng TMB substrate (tingnan ang Talahanayan 1) sa bawat balon, i-seal ang ELISA plate, at i-incubate sa dilim sa 25±3 ℃ sa loob ng 15 min.
5.Pipette ang 100μL ng stop solution sa bawat balon.
6.Sukatin ang absorbance sa wavelength na 450/650nm gamit ang microplate reader.
7.Suriin ang data sa pamamagitan ng SoftMax o katumbas na software.I-plot ang standard curve sa pamamagitan ng paggamit ng four-parameter logistic regression model.
Halimbawa ng Standard Curve
TANDAAN: Kung ang konsentrasyon ng HCP sa sample ay lumampas sa itaas na limitasyon ng karaniwang kurba, kailangan itong maayos na diluted na may dilution buffer bago subukan.
MGA TALA
Ang stop solution ay 2M sulfuric acid, mangyaring hawakan nang may pag-iingat upang maiwasan ang splashing!
