2×PCR Master Mix (walang Dye)
Ang PCR Master Mix ay isang uri ng conventional PCR premixed solution na handa nang gamitin, kasama ang Taq DNA Polymerase, dNTP mix MgCl2 at optimized buffer.Sa panahon ng reaksyon, tanging ang panimulang aklat at template lamang ang maaaring idagdag para sa amplification, na lubos na nagpapadali sa mga hakbang sa pagpapatakbo ng eksperimento.Ang produktong ito ay naglalaman ng mga mahuhusay na stabilizer at maaaring maimbak ng 3 buwan sa 4 ℃.Ang produkto ng PCR ay may 3′-dA protrusion at madaling ma-clone sa T vector.
Mga Kondisyon sa Imbakan
Ang produkto ay dapat na naka-imbak sa -25 ℃~ -15 ℃ sa loob ng dalawang taon.
Mga pagtutukoy
| Fidelity (vs.Taq) | 1× |
| Mainit na Simula | No |
| Overhang | 3′-A |
| Polymerase | Taq DNA Polymerase |
| Format ng Reaksyon | SuperMix o Master Mix |
| Bilis ng Reaksyon | Pamantayan |
| Uri ng Produkto | PCR Master Mix (2×) |
Mga tagubilin
1.Sistema ng Reaksyon
| Mga bahagi | Sukat (μL) |
| Template ng DNA | Angkop |
| Primer 1 (10 μmol/L) | 2 |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 |
| PCR Master Mix | 25 |
| ddH2O | Hanggang 50 |
2.Protokol ng Amplification
| Mga hakbang sa pag-ikot | Temperatura (°C) | Oras | Mga cycle |
| Pre-denaturation | 94 ℃ | 5mins | 1 |
| Denaturasyon | 94 ℃ | 30 seg | 35 |
| Pagsusupil | 50-60 ℃ | 30 seg | |
| Extension | 72 ℃ | 30-60sec/kb | |
| Pangwakas na Extension | 72 ℃ | 10mins | 1 |
Mga Tala:
1) Paggamit ng template: 50-200 ng genomic DNA;0.1-10 ng plasmid DNA.
2) Mg2+konsentrasyon: Ang produktong ito ay naglalaman ng 3 mM ng MgCl2 na angkop para sa karamihan ng mga reaksyon ng PCR.
3) Temperatura ng pagsusubo: Mangyaring sumangguni sa theoretical Tm value ng Primers.Ang temperatura ng pagsusubo ay maaaring itakda sa 2-5 ℃ na mas mababa kaysa sa teoretikal na halaga ng panimulang aklat.
4) Tagal ng extension: Para sa pagkilala sa molekular, 30 sec/kb ang inirerekomenda.Para sa gene cloning, 60sec/kb ay inirerekomenda.
Mga Tala
1.Para sa iyong kaligtasan at kalusugan, mangyaring magsuot ng mga lab coat at disposable gloves para sa operasyon.
2.Para sa paggamit ng pananaliksik lamang!
